шпаргалка

Билет №27.

[ Назад ]



1)Иммуноферментный анализ (ИФА). В основе этого метода лежит присоединение к

анти-телам ферментной метки, что позволяет учитывать результат реакции антиген-

антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня.

В случае применения ИФА для поиска антигена, на стенках лунок адсорбируют

соответст-вующие антитела. Исследуемый материал вносят в лунку, при этом

антиген, взаимодействуя с антителами, фиксируется в ней. Лунки тщательно

промывают буферным раствором, чтобы удалить не адсорбировавшиеся вещества.

Затем вносят антитела против искомого антигена, меченные ферментом. Чаще всего в

качестве фермента-метки используют пероксидазу хрена. После инкубации лунку

снова промывают, чтобы удалить избыток меченных антител, если они не

удерживаются комплексом антиген-антитело, образовавшимся на предыдущем этапе. На

заключительном этапе в лунки вносят хромогенный субстрат (например, о-

фенилендиамин). Ферментативное расщепление субстрата приводит к образованию

окра-шенных продуктов реакции. Таким образом, изменение окраски содержимого

лунки будет свидетельствовать о положительном результате реакции: взаимодействие

антиген – антитело имело место. Иммуно-ферментный анализ или метод – выявление

антигенов с помощью соответствующих им анти-тел, конъюгированных с ферментом-

меткой. После соединения антигена с меченной фермен-том иммунной сывороткой в

смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется

цвет продукта реакции – интенсивность окраски прямо пропорцио-нальна количеству

связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагно-стики вирусных,

бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций,

гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных

препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом

мате-риале.

При серодиагностике используются полистирольные планшеты, на стенках которых

заранее с помощью тех или иных методов адсорбируется ("нагружается") антиген.

Для предотвра-щения неспецифического связывания антител с полистиролом

оставшаяся свободной по-верхность полистирола подвергается специальной

обработке. Исследуемая сыворотка вно-сится в лунку планшета. При этом

гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела

удаляют промыванием. Затем в лунки вносят антитела против иммуноглобулинов

(антител) человека, меченные ферментом. Если в исследуемой сыворотке

присутствовали искомые антитела, то они на данном этапе выступят в роли

антигенов, с ко-торыми прореагируют меченные антитела. Добавление после промывки

хромогенного суб-страта позволит учесть реакцию по развивающемуся окрашиванию в

лунках.

Несомненным преимуществом иммуноферментного анализа перед классическими иммуно-

логическими реакциями (реакция агглютинации, РСК, РНГА) является возможность

количе-ственного анализа без использования серийных разведений. Интенсивность

окраски в лунке пропорциональна количеству фермента, а следовательно количеству

искомого ингредиента (антигена или антител). Измеряя оптическую плотность

жидкости в лунке и сравнивая ее с контролем можно легко определить концентрацию

искомого компонента. Еще одним досто-инством иммуноферментного анализа при

серодиагностике является возможность определе-ния классов специфических антител

(IgG, IgM, IgA), что имеет значение при определении фазы инфекционного процесса

и его остроты.

Радиоиммунный анализ (РИА) – один из методов количественного определения

биологи-чески активных веществ в биологических жидкостях. Был изобретен в 1950-х

годах прошлого столетия Соломоном Берсоном и Розалин Сасмен Ялоу. С его помощью

ученые изучали клиренс инсулина у больных диабетом. В 1977 году за выдающийся

вклад в развитие меди-цины Розалин Сасмен Ялоу была удостоена Нобелевской

премии. Широкое признание и по-пулярность метод получил в 80-е годы, особенно

для определения маркеров HBV и других некультивируемых вирусов.

РИА основывается на конкурентном связывании искомых стабильных и аналогичных им

ме-ченных радионуклидом веществ со специфическими связывающими системами, с

после-дующей их детекцией на специальных счетчиках, так называемых,

радиоспектрометрах. Та-ким образом, главное отличие радиоиммунного анализа от

иммуноферментного анализа (ИФА) заключается в том, что вместо фермента антитело

помечается изотопом. Как правило, для метки антител или антигенов чаще всего

используется изотоп йода 125, который имеет период полураспада 60 дней и высокую

удельную радиоактивность.

Диагностика посредством радиоиммунного анализа производится с целью обнаружения

тех же самых заболеваний, что и при помощи иммуноферментного анализа (смотрите

тему “Им-муноферментный анализ (ИФА)”).

Радиоиммунный анализ обладает довольно высокой чувствительностью и

специфичностью. Неоспоримым преимуществом РИА является возможность

стандартизации и автоматизации метода с получением ответов в цифровом выражении.

Что касается недостатков, то они, как правило, связываются с ограничениями,

определяемыми режимом работы с радиоактивным материалом, и относительно коротким

сроком годности диагностического набора, что связа-но с распадом радиоактивной

метки. Кроме того, диагностика посредством радиоиммунного анализа

предусматривает наличие специализированной лаборатории, а также использование

дорогостоящего оборудования (гамма-счетчиков).

Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления

белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.

Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле,

затем переносят их (блоттинг - от англ, blot, пятно) из геля на активированную

бумагу (1) или нит-роцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы

выпускают такие полоски с "блотами" антигенов. На эти полоски наносят сыворотку

больного (2). Затем, после инкуба-ции, отмывают от несвязавшихся антител

больного и наносят сыворотку против иммуногло-булинов человека, меченную

ферментом (3). Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного +

антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата (4),

изменяющего окраску под действием фермента.

Таким образом, выявляются непосредственно белки вируса, который не только давно

выде-лен и сфотографирован, а ещё и является одним из наиболее изученных.

2)Для исследования берут кровь,биоптаты печени и проводят экспресс-

методы:*иммунохимический (иммунопреципитация в геле, РНГА, ИФА, РИА)

*малекулярно-биологический (ПЦР, ДНК-зондов) и серологические МИ. В сыворотке

крови обнаруживаются HBsAg-это поверхностный АГ HBV,который маркирует

инфицированность вирусом гепатита, и (HBeAg в незначительных количествах -это

ядерный «е»- АГ виру-са,указывающий на реплекацыю вируса в гепатоцитах,высокую

инфекционность крови и вы-сокий риск перинатальной передачи вируса.) IgM анти-

HBc-это АТ класса М к ядерному АГ,один из наиболее ранних сывороточных маркёров

ГВ, который указывает на острую ин-фекцию,при хр гВ маркирует репликацию НВV и

активность процесса в печени. При обост-рении хр ГВ будут обнаруживаться HBcAg-

это ядерный «core» АГ вируса,который маркирует репликацию вируса в

гепатоцитах,обнаруж-ся только при морфологическом исследовании биоптатов печени

и на аутопсии,а в свободном виде в крови не выявляется. Так же АТ к «е» АГ-

указывают на начало реконвалесценции,

3) Бифидумбактерин сухой.

Состав. Бифидумбактерин сухой представляет собой лиофильно высушенную в среде

куль-тивирования во флаконах, ампулах или спрессованную в таблетку микробную

массу живых, антагонистически активных штаммов Bifidobakterium bifidum № 1, 791

или ЛВА-3. Препарат имеет вид пористой или кристаллической массы бежевого или

беловато-серого цвета.

Выпускается в виде биомассы, лиофилизированной во флаконах по 5 доз, в ампулах

по 2 дозы и в таблетках по 10—20 штук ко флаконах или упаковке «Сервак» по 24

таблетки. Каж-дая таблетка — одна доза препарата.

Назначение. Препарат предназначен для лечения детей и с взрослых при

дисбактериозах кишечника, кишечных инфекциях, диарее и запорах, интоксикации,

после длительного при-менения антибиотиков и противоопухолевых препаратов,

радиационного облучения.

Способ применения и дозировка. Бифидумбактерин при кишечных заболеваниях

применя-ют через рот, а в акушерско-гинекологической практике интравагинально в

форме свечей. Содержимое флакона (ампулы) растворяют кипяченой водой комнатной

температуры из рас-чета: 1 чайная ложка на 1 дозу препарата. Необходимое

количество доз выпивают за 20—30 минут до еды. Грудным детям препарат можно

давать перед кормлением.

При кишечных заболеваниях детям первого полугодия жизни препарат назначают по 3

дозы на прием 3 раза в день. Детям второго полугодия и старше — по 5 доз 2 раза

в день.

Детям при сепсисе, пневмонии и других гнойно-инфекционных заболеваниях назначают

по 2—3 дозы 3 раза в день в комплексе с общепринятыми методами лечения основного

заболе-вания. При возникновении у данной группы детей нарушений функции

желудочно-кишечного тракта и угрозы язвенно-некротического энтероколита

дозировку бифидумбактерина увеличивают до 10 доз в сутки.

При острых и хронических воспалительных заболеваниях тонкого и толстого

кишечника, ко-литах и энтероколитах у взрослых рекомендуется по 5 доз 2—3 раза в

день. Длительность курса лечения бифидумбактерином определяется тяжестью

клинических проявлений, возрас-том больного и составляет 2—4 неделя, а в

отдельных случаях—до 3 месяцев.

С профилактической целью назначают по 5 доз 1-2 раза в день в течение 1-2

недель.

Реакция на введение. Применение бифидумбактерина не должно вызывать реакций.

Противопоказания для применения препарата отсутствуют.



































КАТЕГОРИИ:

Network | английский | архитектура эвм | астрономия | аудит | биология | вычислительная математика | география | Гражданское право | демография | дискретная математика | законодательство | история | квантовая физика | компиляторы | КСЕ - Концепция современного естествознания | культурология | линейная алгебра | литература | математическая статистика | математический анализ | Международный стандарт финансовой отчетности МСФО | менеджмент | метрология | механика | немецкий | неорганическая химия | ОБЖ | общая физика | операционные системы | оптимизация в сапр | органическая химия | педагогика | политология | правоведение | прочие дисциплины | психология (методы) | радиоэлектроника | религия | русский | сертификация | сопромат | социология | теория вероятностей | управление в технических системах | физкультура | философия | фотография | французский | школьная математика | экология | экономика | экономика (словарь) | язык Assembler | язык Basic, VB | язык Pascal | язык Си, Си++ |