Билет №25.
1)Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности AT связывать различные
возбуди-тели или их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои
биологические свойства (иными словами, AT нейтрализуют возбудителей). На
практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов. В определённой
степени к ним же относят реакции торможения вирусиндуцированной гемагглютинации
и иммобилизации.
Реакции нейтрализации токсинов применяется для идентификации бактериальных экзо-
токсинов по видовой и типовой их принадлежности, а также для определения
содержания ан-титоксинов в исследуемой сыворотке. Принцип основан на способности
антитоксинов свя-зывать токсин и блокировать его действие. Для идентификации
токсина и определения титра антитоксических AT их смесь вводят лабораторным
животным. При соответствии типа ток-сина и антисыворотки гибели животных не
наблюдают. Нейтрализацию токсинов in vitro оп-ределяют в реакции флоккуляции.
Для определения антитоксического иммунитета у человека часто применяют кожные
пробы (например, пробу Шика).
Реакция нейтрализации вирусов. В сыворотки крови переболевших лиц циркулируют
ан-титела, нейтрализующие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры
возбудителей с сывороткой с последующим введение лабораторному животному или
заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание
животного либо отсутствие гибели клеток в культурах.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА).
Рис. 8. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (схема).
Принцип реакции основан на способности АТ связывать различные вирусы и
нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот
эффект и проявляется в «торможении» гемагглютинации. РТГА применяют при
диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и
идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аг.
Типирование вируса проводят в реакции РТГА с набором типоспецифических
сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы
вируса типа А с антигенами H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 и другие могут быть
дифференцированы в РТГА с на-бором гомологичных типоспецифических сывороток
Исследуемый материал содержит вирус гриппа тип А с антигеном H3N2
Определение титра антител крови больного по РТГА
Развернутая РТГА проводится в лунках пластмассовых пластин. В лунках
готовят 2-х кратные разведения исследуемой сыворотки в объеме 0,25 мл, добавляют
по 0,25 взвеси ви-руса в рабочем разведении и инкубируют 2 ч при температуре
37°С. Затем добавляют по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов, инкубируют еще 2
ч и оценивают результат по феномену гемагглютинации.
При положительной РТГА образуется плотный осадок эритроцитов на дне лунки в виде
диска или кольца с ровными краями. Титр антител определяют по последней лунке с
положи-тельной РТГА.
Результаты реакции нейтрализации выделенных от больных вирусов с моновалент-
ными иммунными сыворотками к вирусам полиомиелита I-III типов.
Выделение энтеровирусов из исследуемого материала осуществляют путем заражения
кле-точных культур. Индикацию вирусов проводят по цитопатогеному действию (ЦПД):
на 2-3-й день инкубации при 35°С наблюдается полная или частичная дегенерация
клеток. Основным методом идентификации выделенного вируса является
серотипирование в реакции нейтрали-зации. С этой целью материал из чистой
культуры выделенного вируса обрабатывают смесью диагностических моновалентных
сывороток к различным серотипам энтеровирусов. При этом в начале определяют тип
вируса, затем его принадлежность к определенному серотипу.
Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток: А - цитопатогенный эффект
(ЦПЭ) или цитопатогенное действие (ЦПД) в результате размно-жения вирусов; Б -
ЦПЭ отсутствует в результате предварительной нейтрализации вирусов антителами.
2)Возбудитель клещевого энцефалита относится к семейсиву Flaviviridae роду
Flavivirus. На основе эпид анамнеза и клинических проявлений,характерных для
клещевого энцефалита.
Материалом для исследования служит кровь и цереброспинальная жидкость больного,
так же можно взять боиптаты внутренних органов и г.м умерших новорожденных белых
мышей и культур кл-к. Идентификацию в суспензиях мозга мышей и культуральной
жидкости про-водят в РТГА, РН, РСК, а в монослое культур кл-к в РИФ.
Обнаруживают АТ в парных сы-воротках и цереброспинальной жидкости с помощью РСК
и РТГА и др серологич реакциях. Экспресс-диагностика основана на обнаружении
вирусного АГ в крови с помощью РНГА и ИФА, выявление IgМ АТ на первой неделе
заб-ия в цереброспиналь жидкости и РНК-вируса в крови и цереброспин жидк-ти у
людей, в клещах и внутр орг-в жив-х с помощью ПЦР.
Для лечения и экстренной проф-ки у непривитых лиц и привитых,получивших
множествен-ные укусы, применяют специфический гомологичный донорский
иммуноглобулин против клещ энцефалита, полученный из плазмы доноров. Серотерапию
назначают не позднее 3-4 дня заболевания. Или специфич гетерологичный лошадиный
иммуноглобулин.
3) Вакцина бруцеллезная живая сухая.
Состав. Вакцина представляет собой лиофилизированную живую культуру вакцинного
штамма Вг. abortus 19-ВА.
Выпускается в ампулах во 1,0 мл (5-10 доз), по 5 ампул в упаковке, имеет вид
однородной аморфной или кристаллической массы белого или желтоватого цвета.
Назначение. Вакцина предназначена для профилактики бруцеллеза козье - овечьего
вида у взрослых с 18 лет. Обеспечивает развитие иммунитета продолжительностью 10
—12 мес.
Способ введения и дозировка. Вакцинацию проводят однократно накожно или
подкожно, ревакцинацию — накожно, интервал между прививками составляет 10— 12
мес. Для вакци-нации накожным способом препарат вводят в наружную поверхность
средней трети плеча. 2 капли вакцины наносят на расстоянии 30 - 40 мм друг от
друга, кожу натягивают и стериль-ным оспопрививателем пером производят через
каждую каплю 6 насечек. При ревакцинации применяют половинную дозу, т. е.
наносят 1 каплю, через которую делают 6 насечек. Для вакцинации подкожным
способом препарат вводят по 1 мл в область наружной поверхности плеча.
Прививочная доза препарата в 25 раз меньше, чем при накожной вакцинации.
Прививочные реакции. Местная и общая реакции на вакцинацию незначительны.
Местная реакция может появиться через 24—48 часов в виде гиперемии и
инфильтрата кожи. Общая реакция возникает в первые сутки у 1-2% привитых и
выражается недомоганием, головной болью, повышением температуры тела до З7,5——38
°С.
Противопоказания — острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические
заболевания в стадии обострения или декомпенсации, аллергические заболевания,
коллаге-нозы, болезни крови, беременность, переболевшие бруцеллезом
(положительная серологиче-ская или аллергическая реакция на бруцеллез), лечение
стероидными гормонами, антимета-болитами, рентгенотерапия, злокачественные
новообразования.