Билет №14.
1) Иммунная система располагает независимым от системы комплемента способом
уничто-жения чужеродных клеток. Эта форма иммунного реагирования осуществляется
непосредст-венно клетками-киллерами и получила название «киллинг, опосредованный
клетками».
Киллинг способны осуществлять активированные фагоциты, Т-киллеры,
естественные киллеры (NK-клетки), К-клетки и некоторые другие. Мишенью для них
являются раково-трансформированные, мутантные или зараженные вирусами клетки,
грибы, простейшие, гельминты, некоторые бактерии и другие чужеродные клетки.
Киллеры вырабатывают ряд веществ, обладающих цитотоксическим или
цитолитиче-ским действием. Эти клетки осуществляют свою функцию дистантно (на
расстоянии) или при непосредственном контакте. Распознавание генетической
чужеродности клеток-мишеней имеет различные механизмы.
Активированные фагоциты продуцируют перекисные ион-радикалы и ферменты,
которые могут поражать клетки на расстоянии или после фагоцитоза. Первичное
распознава-ние чужеродных клеток происходит по антителам, которые предварительно
связались с по-верхностными антигенами клеток-мишеней. Киллерную функцию
фагоцитов активи-руют лимфокины, эндотоксин, двунитевая ДНК и некоторые другие
биологически активные соединения.
Т-киллеры самостоятельно, без участия антител(антителонезависимая к-о
цитотоксичность), распознают генетически чужеродные клетки по строению антигенов
гистосовместимости, расположенных на поверхности цитоплазматической мембраны
этой клетки.
Процесс инактивации (убийства) клетки-мишени осуществляется в несколько этапов:
Установление плотного контакта: Т-киллер прикрепляется к поверхности клетки-
мишени; при этом между клетками образуется узкое синаптическое пространство.
Активация Т-киллера: происходит полярное перераспределение внутриклеточных
органелл киллера — гранулы, содержащие фермент-токсин, и аппарат Гольджи
перемещаются в сто-рону клетки-мишени.
Экзоцитоз фермента-токсина: фермент-токсин выделяется в узкое синаптическое про-
странство между клетками.
Токсическое воздействие: в результате воздействия фермента-токсина в мембране
клетки-мишени образуются сквозные поры, и клетка лизируется.
Т-киллеры активируются при непосредственном контакте с чужеродными клетками и
при воздействии интерлейкинов (ИЛ-1, ИЛ-2), интерферона-γ и других
иммуноцитокинов. Один киллер способен последовательно убить несколько клеток-
мишеней.
Точный механизм специфического распознавания Т-киллером мембранных антигенов
клетки-мишени предотвращает ошибочный лизис собственных нормальных клеток как
путем контакта, так и через выделение ферментов-токсинов в межклеточную среду.
В процессе контакта с чужеродными клетками формируется иммунологическая память,
и повторное появление в организме клеток, несущих те же антигенные детерминанты,
приводит к формированию реакции по типу вторичного иммунного ответа, т.е.
киллерная активность отличается высокой интенсивностью и проявляется в очень
короткие сроки.
Т-киллеры различаются по типу синтезируемого фермента-токсина и быстроте
действия. Наиболее изучены киллеры, продуцирующие фермент-токсин перфорин. Между
моментом выброса перфорина и гибелью клетки проходит несколько десятков минут.
Другие Т-киллеры, лишенные перфорина, синтезируют медленно действующие
медиаторы. Они лизируют клетку-мишень только через несколько недель.
Механизм действия естественных киллеров изучен мало. Известно, что он отличается
от действия Т-киллера. У NK-клеток нет рецепторов для специфического
распознавания анти-генов, тем не менее естественные киллеры способны убивать
отдельные виды раково-трансформированных клеток без предварительной подготовки.
Известно, что их функцио-нальная активность регулируется ИЛ-2 и интерфероном-γ.
К-клетки — это особая субпопуляция лимфоцитов, которые также способны лизировать
клетки в присутствии специфических антител — антителозависимая клеточная
цитотоксич-ность (АЗКЦ). Механизм этой реакции подобен действию активированных
фагоцитов.
Не так давно был открыт феномен индуцированной запрограммированной гибели
клеток, или апоптоз. При помощи апоптоза организм управляет численностью клонов
иммуноком-петентных клеток и может ее значительно снижать или вообще уничтожать
эти клетки в слу-чае ненадобности или аутоагрессивности. Апоптоз индуцируется
лимфокинами.
Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность осущ-ся с помощью эо-
зинофилы, активированные макрофаги и естественные киллеры
эозинофилия всегда сопутствует гельминтозам, но только в последние годы были
получены данные, что эти клетки могут функционировать в качестве киллеров.
Образовавшиеся анти-тела относились к классу IgG, и эозинофилы прикреплялись к
Fс-участку IgG посредством клеточного Ес-рецептора.
Активированные макрофаги-перекисными радкалами и ферментами,пораж-ют мембра-
ну.Первичное распознавание чужеродных клеток при помощи FcR по АГ-ам,которые
пред-варительно связались с поверхностыми аг клеток-мишеней.
2.) Микробиологическая диагностика сибирской язвы
Возбудитель сибирской язвы —споро образующая аэробная палочка Вас. anthracis,
относит-ся к семейству Bacillaceae. Наиболее достоверным методом лабораторной
диагностики си-бирской язвы является выделение из исследуемого материала
культуры возбудителя. Диаг-ностическую ценность представляют также реакция
термопреципитации по Асколи и кожно-аллергическая проба.
Бактериоскопическое исследование Изучение окрашенных по Граму мазков из
патологи-ческого материала позволяет обнаружить возбудителя, представляющего
собой грамм(+) крупную (1-2X6-10. мкм) неподвижную стрептобациллу. В организме
больных и на белковой питательной среде микробы образуют капсулу , в почве —
споры .
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с
питатель-ным агаром, кровяным агаром и в пробирку с питательным бульоном. Посевы
инкубируют при 37°С в течение 18—20 ч. В бульоне культура Вас. anthracis растет
в виде хлопьевидного осадка; на агаре вирулентные штаммы образуют колонии в R-
форме, имеющие под малым увеличением микроскопа вид «львиной гривы» или «головы
медузы». Авирулентные или слабовирулентные бактерии образуют S-формы колоний.
Сибиреязвенная палочка обладает сахаролитическими свойствами, не гемолизирует
эрит-роциты, медленно разжижает желатину (в виде елочки верхушкой вниз). Под
действием пе-нициллина сибиреязвенные палочки образуют сферопласты,имеющие вид
«жемчужин». Это явление используется для дифференциации Вас. anthracis от
непатогенных бацилл.
Биопроба. Исследуемый материал вводят подкожно белым мышам, морским свинкам или
кроликам. Павших животных вскрывают, готовят мазки из крови и внутренних
органов, делают посевы для выделения чистой культуры возбудителя.'
Серодиагностика. При необходимости диагностировать сибирскую язву у павших
живот-ных или у людей, умерших от неизвестной болезни, напоминающей висцеральную
форму си-бирской язвы, а также для определения зараженности сырья (кожа, мех,
шерсть) ставят реакцию термопреципитации по Асколи. Кусочки органов, шерсти,
меха измельчают и кипя-тят в пробирке с изотоническим раствором хлорида натрия в
течение 10—15 мин, после чего фильтруют до полной прозрачности. Контрольный
термоэкстракт готовят из того же мате-риала, взятого от здорового животного .
Ускоренная диагностика сибирской язвы проводится методом ИФА, который позволяет
вы-явить капсульные формы Вас. anthracis в экссудате. Мазки из экссудата через 5
—18 ч после заражения животного обрабатывают капсульной сибиреязвенной
антисывороткой, а затем флюоресцирующей антикроличьей сывороткой, меченной
"родамином. В препаратах, содер-жащих капсульные бациллы, наблюдается желто-
зеленое свечение возбудителя.
Кожно-аллергическая проба. Ставится на внутренней поверхности предплечья — внут-
рикожно вводят 0,1 мл антраксина. При положительной реакции через 24 ч
появляются гипе-ремия и инфильтрат.
3) Иммуноглобулин человека антистафилококковый
Содержащая антитела к стафилококковому экзотоксину иммунологически активная
белковая фракция, выделенная из сыворотки или плазмы крови доноров, очищенная и
концентриро-ванная методом фракционирования этиловым спиртом.
Инфекции стафилококковой этиологии.