Билет №4.
1) Комплемент является одним из важных факторов гуморального иммунитета, играю-
щим большую роль в защите организма от антигенов. Он был открыт в 1899 г.
француз-ским иммунологом Ж.Борде, назвавшим его «алексином». Современное
название ком-плементу дал П.Эрлих.
Комплемент представляет собой сложный комплекс белков сыворотки крови, находя-
щийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при образовании комплекса
антигена с антителом или при агрегации антигена, т.е. в начале иммунного
процесса. В состав комплемента входят 20 взаимодействующих между собой белков, 9
из которых являются основными компонентами комплемента, их обозначают как CI,
C2, СЗ...С9. Важную роль играют также факторы В, D и Р (пропердин). Белки
комплемента относятся к глобулинам и различаются по ряду физико-химических
свойств.
Функции комплемента многообразны: а) он участвует в лизисе микробных и других
кле-ток (цитотоксическое действие); б) обладает хемотаксической активностью; в)
участвует в анафилаксии; г) участвует в фагоцитозе. Следовательно, комплемент
является компо-нентом многих иммунолитических реакций, направленных на
освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов
(например, опухолевых клеток, трансплантата).
Механизм активации комплемента очень сложен и представляет собой каскад
фермента-тивных протеолитических реакций. В результате образуется активный
цитотоксический комплекс, разрушающий стенку бактерии и других клеток.
Существуют 3 пути активации комплемента: классический и альтернативный и
лектиновый.
По классическому пути комплемент активируется комплексом антиген—антитело.
Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух
мо-лекул IgG. Процесс начинается с присоединения к комплексу антиген—антитело
компо-нента С1, который распадается на субъединицы Clq, Clr и СIs. Далее в
реакции участвуют последовательно активированные «ранние» компоненты
комплемента: С4, С2 , СЗ. Эта реакция имеет характер усиливающегося каскада:
одна молекула предыдущего компо-нента активирует несколько молекул последующего.
«Ранний» компонент комплемента СЗ активирует компонент С5, который обладает
свойством прикрепляться к мембране клетки. На компоненте С5 путем
последовательного присоединения «поздних» компо-нентов С6, С7, С8 и С9
образуется литический или мембраноатакующий комплекс, кото-рый нарушает
целостность мембраны (образует в ней дыру), в результате чего клетка по-
гибает.(осмотический лизис)
Альтернативный путь активации комплемента происходит без участия антител. Этот
путь характерен для защиты от грамм-отрицательных микробов. Каскадная цепная
реак-ция при альтернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например,
полиса-харида) с протеинами В и D и пропердином (Р), затем активируется
компонент СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути: образуется
мембраноатакующий ком-плекс.
Лектиновый путь без участия антител.Инициируется маннозосвязывающим белком сы-
воротки крови ,который после связ-я с остатками маннозы на поверхностимикроб
клеток катализирует С4,далее как классический.
В процессе активации комплемента образуются продукты протеолиза его компонентов
— субъединицы СЗа и СЗЬ, С5а и С5Ь и другие, которые обладают высокой
биологической активностью. Например, СЗа и С5а участвуют в анафилактических
реакциях, являются хемоаттрактантами, СЗЬ является опсонином и т.д.
Сложная каскадная реакция комплемента осуществляется с участием Са2* и Mg2*.
Титрование комплемента.
Для определения титра комплемента исследуемую сыворотку разводят и добавляют ге-
молитическую систему (смесь равных объемов эритроцитов барана и гемолитической
сы-воротки). Пробирки инкубируют при 37ºС 30 минут, встряхивая каждые 10 минут.
Для контроля готовят разведения эритроцитов и дисиллированной воды: 0,1 мл + 2,9
мл (со-ответствует 20 % гемолизу), 0,25 мл + 2,75 мл (соответствует 50 %
гемолизу), 0,35 мл + 2,65 мл (соответствует 70 % гемолизу).Затем содержимое
пробирки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут и определяют пробирку,
соответствующую 50 % гемолизу. Количество комплемента, внесенное в эту пробирку,
делят на исходное разведение и узнают, какое количество неразведенной сыворотки
дает этот феномен. Полученная ве-личина будет соответствовать 1 единице СН50.
Вычисляют, сколько таких единиц будет в 1 мл неразведенной сыворотки (схема
титрования комплемента приведена в приложении). Показатели основных гуморальных
факторов иммунитета здоровых людей приведены в таблице 7.
Определение количества пропердина.
Опыт ставится в двух пробирках. Опытная содержит испытуемую сыворотку, зимозан и
комплемент, контрольная – только испытуемую сыворотку и комплемент. Пробирки ин-
кубируют при 37ºС 60 минут. Далее в обеих пробирках по общепринятой методике
тит-рую комплемент. Титр комплемента в контрольной пробирке показывает, какое
количе-ство комплемента было в опытной пробирке до образования комплекса
пропердин-зимозан. Титрование же комплемента в опытной пробирке показывает какое
количество осталось несвязанным после образования этого комплекса. По разнице
полученных еди-ниц можно судить о количестве комплемента, связанного комплексом
пропердин-зимозан. За 1 единицу пропердина принимается его количество, которое
полностью свя-зывает весь комплемент в 1 мл сыворотки.
2)Escherichia coli? Бактерии хорошо растут на простых питательных средах: (МПБ),
(МПА). На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок не-
большой, сероватого цвета, легкоразбивающийся. Образуют пристеночное кольцо,
пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с
серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо образуют
плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным
металличе-ским блеском (Е. coli) или без блеска (E.aerogenes). Большинство
бактерий группы ки-шечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают
молоко, расщепляют пеп-тоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода,
обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и
других сахаров, а также спиртов. Не обла-дают оксидазной активностью. По
способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на
лактозоотрицательные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или
колиформные, которые формируются по международным стандартам. Из группы ЛКП
выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу
при температуре 44,5°С . К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной
среде.
Бактериологическое исследование . Испражнения засевают на чашки со средой Эндо
для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37°С до следующего
дня, затем из части красной колонии делают мазок, окрашивают по Граму и
микроскопи-руют. По морфологии эшерихии практически не отличаются от шигелл и
сальмонелл и патогенные от непатогенных нмф. Материал (из лактозположительных)из
другой части колонии используют для постановки реакции агглютинации на стекле со
смесью ОВ-сывороток, содержащих антитела против наиболее распространенных
серогрупп энтеро-патогенных эшерихий. Обычно проверяют на агглютинабельность не
менее 10 колоний с каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию
агглютинации с сыворот-ками 026:В6, 055:В5, О111:В4, 0124:В17 и др., после чего
делают предварительное за-ключение. Затем пересевают несколько агглютинабельных
колоний на скошенный пита-тельный агар для получения чистых культур. На 3-й день
проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции агглютинации на стекле со
смесью ОВ-сыворотками, «+»-развернутур р-ю агглютинации с соот.сыв-ой.
Экспрсс:ПЦР(ПРЕД.ДИАГНОЗ)
3)Аллерген туберкулезный очищенный в стандартном разведении (Туберкулин)
Очищенный туберкулин в стандартном разведении представляет собой смесь
фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий туберкулеза человеческого и
бычьего видов, осажденных трихлоруксусной кислотой, обработанных этиловым
спиртом и эфиром для наркоза
Назначение. Туберкулин предназначен для массовой туберкулинодиагностики, с
целью:
с целью отбора контингента для ревакцинации БЦЖ, а также перед первичной
вакцина-цией детей в возрасте 2 месяца и более. для диагностики туберкулеза, в
том числе для раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и
подростков. для определения инфицирования микобактериями туберкулеза.