Билет №3.
1) Фагоцитоз (от греч. phagos — пожираю, cyios — клетка), открытый и изученный
И.И.МечниковымюМеханизм фагоцитоза состоит в поглощении, переваривании, инак-
тивации инородных для организма веществ специализированными клетками — фагоци-
тами. К фагоцитирующим клеткам И.И.Мечников отнес макрофаги и микрофаги. В на-
стоящее время все фагоциты объединены в единую мононуклеарную фагоцитирующую
систему. В нее включены тканевые макрофаги (альвеолярные, перитонеальные и др.),
клетки Лангерганса (белые отро-стчатые эпидермоциты) и Гренштайна (эпидермоциты
кожи), клетки Купфера (звездчатые ретикулоэндотелиоциты), эпители-оидные клетки,
нейтрофилы и эозинофилы крови и др.
Функции фагоцитов очень обширны. Фагоциты 1) удаляют из организма отмирающие
клетки и их структуры (эритроциты, раковые клетки); 2) удаляют
неметаболизируемые неорганические вещества, попадающие во внутреннюю среду
организма тем или иным путем (например, частички угля, минеральную и другую
пыль, проникающую в дыха-тельные пути); 3) поглощают и инактивируют микробы
(бактерии, вирусы, грибы), их останки и продукты; 4) синтезируют разнообразные
биологически активные вещества, необходимые для обеспечения резистентности
организма (некоторые компоненты ком-племента, лизоцим, интерферон, интерлейкины
и др.); 5) участвуют в регуляции иммун-ной системы; 6) осуществляют
«ознакомление» 7-хелперов с антигенами. Следователь-но, фагоциты являются, с
одной стороны, своеобразными «мусорщиками», очищающими организм от всех
инородных частиц независимо от их природы и происхождения (неспе-цифическая
функция), а с другой стороны, участвуют в процессе специфического имму-нитета
путем представления антигена иммунокомпетентным клеткам (Т- и В-лимфоцитам) и в
регуляции их активности.
Процесс фагоцитоза, стадий: 1) приближение фагоцита к объекту поглощения
(хемотак-сис); 2) адсорбция поглощаемого вещества на поверхности фагоцита; 3)
поглощение ве-щества путем инвагинации клеточной мембраны с образованием в
цитоплазме фагосомы, содержащей вещество; 4) слияние фагосомы с лизосомой клетки
с образованием фаголи-зосомы; 5) переваривание вещества в фаголизосоме с помощью
ферментов.
Для осуществления своих функций фагоциты имеют рецепторный аппарат и набор лити-
ческих ферментов. На цитоп-лазматической мембране находятся, например, рецепторы
для компонентов комплемента, Fс-фрагментов иммуноглобулинов, а также антигены
гис-тосовместимости I и II классов. Внутриклеточные лизосомы содержат около 40
различ-ных ферментов, способных «переварить» практически любое вещество.
1.хемотаксисом (от греч. chymeia — искусство сплавления металлов и taxis —
располо-жение, построение). Это АТФ-зави-симый процесс, в котором участвуют
сократительные белки актин и миозин. К хемоаттрактантам относятся, например,
фрагменты компонентов комплемента (СЗа и С5а), некоторые лимфоки-ны, продукты
распада клеток и бактерий.
2.Адсорбция вещества на поверхности фагоцита осуществляется за счет слабых
химиче-ских взаимодействий и происходит либо спонтанно, неспецифически, либо
путем связы-вания со специфическими рецепторами (для иммуноглобулинов,
компонентов компле-мента). «Захват» фагоцитом вещества вызывает выработку
большого количества пере-кисных радикалов («кислородный взрыв»), которые
вызывают необратимые летальные повреждения как цельных клеток, так и отдельных
молекул.
3.Поглощение адсорбированного на фагоците вещества происходит путем эндоцитоза.
Это энергозависимый процесс, связанный с преобразованием энергии химических
связей молекулы АТФ в сократительную активность внутриклеточных актина и
миозина. Окру-жение фагоцитируемого вещества двуслойной ци-топлазматической
мембраной и образо-вание изолированного внутриклеточного пузырька — фагосомы
напоминает «застегива-ние молнии». Внутри фагосомы продолжается атака
поглощенного вещества перекисны-ми радикалами.
4.После слияния фагосомы и лизосомы и образования в цитоплазме фаголизосомы про-
исходит активация лизосомных ферментов. Эти ферменты разрушают поглощенное ве-
щество до элементарных составляющих, пригодных для дальнейшей утилизации для
нужд самого фагоцита. 5.При этом случайный небольшой фрагмент перевариваемого
вещества (размером до 9 аминокислот) может быть включен в молекулу антигена гис-
тосовместимости II класса и в ее составе выставлен (экспрес-сирован) на
поверхности фа-гоцита для «ознакомления» с ним Т-хелперов. Непереваренные
остатки вещества «хоро-нятся» вместе с погибшим от старости фагоцитом.
Ферментативное расщепление вещест-ва может также происходить вне-клеточно при
выходе ферментов за пределы фагоцита.
Фагоциты, как правило, «переваривают» захваченные бактерии, грибы, вирусы,
осущест-вляя таким образом завершенный фагоцитоз. Однако иногда этот процесс
бывает неза-вершенным: поглощенные бактерии (например, гонококки) или вирусы
(например, воз-будители ВИЧ-инфекции, натуральной оспы) блокируют ферментативную
активность фагоцита, не погибают, не разрушаются и даже размножаются в
фагоцитах. Такой про-цесс назван незавершенным фагоцитозом.
Процесс фагоцитоза активируется под влиянием антител-опсонинов, адъювантов,
комплемента, иммуноцитокинов (ин-терлейкин-2) и других факторов. Механизм
активи-рующего действия антител основан на связывании комплекса антиген-антитело
с рецеп-торами для Fc-фрагментов иммуноглобулинов на фагоцитах. Аналогично
действует ком-племент, который способствует связыванию на специфических для него
рецепторах фа-гоцита (С-рецепторы) комплекса антиген—антитело. Ацъюванты
укрупняют молекулы антигена и таким образом облегчают процесс его поглощения,
так как активность фаго-цитоза зависит от величины поглощаемой частицы.
Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов.
Для оценки фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови к цитратной
крови, взятой из пальца или локтевой вены, добавляют взвесь инактивированной
микроб-ной культуры с концентрацией 2 млрд микробов в 1 мл. Смесь инкубируют 30
минут при 37ºС, центрифугируют при 1500 об/мин, удаляют надоосадочный слой, с
помощью пи-петки Пастера осторожно отсасывают серебристый слой лейкоцитов,
готовят мазки, фик-сируют спирто-эфирной смесью, красят по Романовскому-Гимзе и
микроскопируют. Подсчет фагоцитированных микробных клеток ведут в 200
нейтрофилах (50 моноцитах), рассчитывают фагоцитарный индекс (процент
фагоцитирующих лейкоцитов) и фагоци-тарное число (среднее число микробов,
поглощенных одним активным фагоцитом). По-лученные данные сравнивают с нормами
Интенсивность реакции фагоцитоза для че-ловека в норме
(нейтрофилы)
Показатели Дети Взрослые
Фагоцитарный индекс, % 60 75–80
Фагоцитарное число 12 14–15
Показатель завершенности фагоцитоза, % 50 55–60
НСТ-тест (индекс активно-сти нейтрофилов) 0,1–0,15 0,1–0,15
НСТ-тест
В качестве косвенного показателя бактерицидности фагоцитирующих клеток оценивают
интенсивность окислительного взрыва в фагоцитах по способности восстанавливать
жел-тый краситель нитросиний тетразолий (НСТ) с формированием в цитоплазме
клеток осадка темно-синео формазана (учитывают долю формазан-положительных
клеток в процентах). При инкубации лейкоцитов здоровых людей только с красителем
доля формазан-положительных клеток обычно не превышает 1–2 %, в присутствии
индукторов окислительного взрыва (клеток микроорганизмов, бактериальных
липополисахаридов и др.) может достигать 100 %. Снижение доли формазан-
положительных клеток свидетельствует о дефектности кислородзависимого механизма
бактерицидности фагоцитов.
2)Гонококк род Neisseria вид gonorrhoeae.Методы
Острая гонорея, ведущий метод – микроскопический. Из исследуемого материала
делают два мазка, один окрашивают по Граму, другой – метиленовым синим. При
наличии в маз-ке гонококков видны грам- диплококки, расположенные внутри
лейкоитов (незавершен-ный фагоцитоз). При хронической гонорее гонококки нах. вне
клеток, и имеют атипичную форму в виде шаров или мелких образований. Поэтому для
диагностики хронической гонореи применяют серологический метод (РСК, РПГА),
бактериологический метод. Бактериологическое исследование. Материал засевают на
чашки Петри со специ-альными питательными средами — КДС, сывороточным агаром и
др. Среда КДС содер-жит питательный агар с добавлением казеина, дрожжевого
экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37 "С в атмосфере с
повышенным содержанием СО2 (не менее 3 %) в течение 24—72 ч. Гонококки образуют
круглые прозрачные колонии, напоминаю-щие капли росы. Подозрительные колонии
пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур,
которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах "пестрого" ряда
(полужидкий агар с сывороткой и углеводом) или с помощью микротест-систем.
Гонококки ферментируют только глюкозу с образованием кислоты. Серологический
диагноз ставят с помощью РСК. Реакция ставится для обна-ружения антител в
сыворотке крови больного, с помощью известного антигена, которое представляет
собой взвесь убитых гонококков.Учет результата реакции начинают с кон-трольных
пробирок. При наличии гемолиза в контрольных пробирках, о результатах опы-та
судят по опытной пробирке.
3)ТУЛЯРИН, биологический препарат, применяемый для аллергич. диагностики
туляремии, взвесь в глицерино-физиологич. р-ре убитых при t 70 °С бактерий. Пре-
парат вводят (0,3—0,5 мл) внутрикожно. При положит. результате на месте введения
Т. наблюдают гиперемию и отёк.